Астэаартоз (ОА) - адно з працяглых хранічных дэгенератыўных захворванняў касцяных суставаў, якое дзівіць насельніцтва ва ўзросце старэйшыя за 65 гадоў [
1]. Як правіла, у пацыентаў з ОА дыягнастуецца пашкоджанне храстка, запаленне сіновіі і эрозія хандрацытаў, якія выклікаюць боль і фізічны дыстрэс.
2]. Боль пры артрыце ў асноўным выклікана дэгенерацыяй храстка ў суставах з-за запалення, і калі храсток сур'ёзна пашкоджаны, косці могуць сутыкнуцца адна з адной, выклікаючы невыносны боль і фізічныя цяжкасці [
3]. Удзел медыятараў запалення з такімі сімптомамі, як боль, прыпухласць і скаванасць сустава, добра дакументаваны. У пацыентаў з ОА ў сіновіальной вадкасці выяўляюцца запаленчыя цітокіны, якія выклікаюць эрозію храстковай тканіны і субхондральной косткі.
4]. Дзве асноўныя скаргі, якія звычайна маюць пацыенты з ОА, - гэта боль і запаленне сіновіальной абалонкі. Такім чынам, асноўныя мэты сучаснай тэрапіі ОА - паменшыць боль і запаленне. [
5]. Нягледзячы на тое, што даступныя метады лячэння ОА, у тым ліку несцероідные і стэроідныя прэпараты, даказалі сваю эфектыўнасць у палягчэнні болю і запалення, доўгатэрміновае выкарыстанне гэтых прэпаратаў мае сур'ёзныя наступствы для здароўя, такія як сардэчна-сасудзістыя, страўнікава-кішачныя і нырачныя дысфункцыі.
6]. Такім чынам, для лячэння астэаартоз неабходна распрацаваць больш эфектыўныя лекі з меншай колькасцю пабочных эфектаў.
Натуральныя прадукты для здароўя становяцца ўсё больш папулярнымі з-за іх бяспекі і лёгкадаступнасці [
7]. Традыцыйныя карэйскія лекі даказалі сваю эфектыўнасць супраць некалькіх запаленчых захворванняў, уключаючы артрыт [
8]. Aucklandia lappa DC. вядомы сваімі лячэбнымі ўласцівасцямі, такімі як узмацненне цыркуляцыі цы для палягчэння болю і заспакаення страўніка, і традыцыйна выкарыстоўваецца як натуральны анальгетык [
9]. Папярэднія паведамленні паказваюць, што A. lappa валодае супрацьзапаленчым [
10,
11], анальгетык [
12], супрацьракавы [
13], і гастропротекторное [
14] эфекты. Розная біялагічная актыўнасць A. lappa абумоўлена яго асноўнымі актыўнымі злучэннямі: костунолідам, дэгідракастулалактонам, дыгідракастуналідам, костуслактонам, α-касталам, сасурэялактонам і кастулактонам [
15]. Ранейшыя даследаванні сцвярджаюць, што кастунолід прадэманстраваў супрацьзапаленчыя ўласцівасці ліпапаліцукрыду (ЛПС), які індукаваў макрафагі праз рэгуляцыю NF-kB і шляху бялку цеплавога шоку.
16,
17]. Аднак ні адно даследаванне не даследавала патэнцыйную дзейнасць A. lappa для лячэння ОА. У цяперашнім даследаванні даследаваліся тэрапеўтычныя эфекты A. lappa супраць ОА з выкарыстаннем (монанатрыю-ёдаацэтату) MIA і мадэляў на грызунах, выкліканых воцатнай кіслатой.
Монанатрый-ёдаацэтат (MIA) выкарыстоўваецца, як вядома, для стварэння большай часткі болевых паводзін і патафізіялагічных асаблівасцей ОА ў жывёл.
18,
19,
20]. Пры ўвядзенні ў каленныя суставы MIA парушае метабалізм хандрацытаў і выклікае запаленне і сімптомы запалення, такія як эрозія храстка і субхондральной косткі, асноўныя сімптомы ОА [
18]. Рэакцыя курчаў, выкліканая воцатнай кіслатой, шырока разглядаецца як сімуляцыя перыферычнага болю ў жывёл, дзе запаленчы боль можна колькасна вымераць [
19]. Клеткавая лінія мышыных макрафагаў RAW264.7 шырока выкарыстоўваецца для вывучэння рэакцыі клетак на запаленне. Пасля актывацыі LPS макрафагі RAW264 актывуюць запаленчыя шляхі і вылучаюць некалькі запаленчых пасрэднікаў, такіх як TNF-α, ЦОГ-2, IL-1β, iNOS і IL-6.
20]. Гэта даследаванне ацэньвала антынацыцэптыўныя і супрацьзапаленчыя эфекты A. lappa супраць ОА на жывёльнай мадэлі MIA, жывёльнай мадэлі, індукаванай воцатнай кіслатой, і клетках RAW264.7, актываваных LPS.
2. Матэрыялы і метады
2.1. Раслінны матэрыял
Высушаны корань A. lappa DC. які выкарыстоўваўся ў эксперыменце, быў набыты ў Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Сеул, Карэя). Ён быў ідэнтыфікаваны прафесарам Донгхунам Лі, кафедрай фітафармакалогіі палкоўніка карэйскай медыцыны Універсітэта Гачон, а нумар узору ваўчара быў зададзены як 18060301.
2.2. ВЭЖХ-аналіз экстракта A. lappa
A. lappa экстрагировали з дапамогай зваротнага халадзільніка (дыстыляваная вада, 3 ч пры 100 ° С). Выняты раствор фільтравалі і кандэнсавалі з дапамогай выпарніка нізкага ціску. Экстракт A. lappa меў выхад 44,69% пасля сублимационной сушкі пры тэмпературы -80 °C. Храматаграфічны аналіз A. lappa праводзіўся з ВЭЖХ, падключанай з дапамогай сістэмы ВЭЖХ 1260 InfinityⅡ (Agilent, Пал-Альта, Каліфорнія, ЗША). Для храматычнага падзелу выкарыстоўвалі калонку EclipseXDB C18 (4,6 × 250 мм, 5 мкм, Agilent) пры 35 °C. У агульнай складанасці 100 мг ўзору разводзяць у 10 мл 50% метанолу і апрацоўваюць ультрагукам на працягу 10 хвілін. Узоры фільтравалі з дапамогай шпрыцавага фільтра (Waters Corp., Milford, MA, USA) 0,45 мкм. Склад рухомай фазы ўяўляў сабой 0,1% фосфарную кіслату (А) і ацэтанітрыл (Б), і калонка элюировалась наступным чынам: 0-60 мін, 0%; 60–65 хвілін, 100%; 65–67 мін, 100%; 67–72 мін, 0% растваральнік B з хуткасцю патоку 1,0 мл/мін. Эффлюент назіралі пры 210 нм, выкарыстоўваючы аб'ём ін'екцыі 10 мкл. Аналіз праводзілі ў трох паўторах.
2.3. Утрыманне і кіраванне жывёламі
Самцы пацукоў Sprague-Dawley (SD) ва ўзросце 5 тыдняў і самцы мышэй ICR ва ўзросце 6 тыдняў былі набыты ў Samtako Bio Korea (Кёнгі-да, Карэя). Жывёл утрымлівалі ў пакоі з пастаяннай тэмпературай (22 ± 2 °C) і вільготнасцю (55 ± 10%) і цыклам светла/цемры 12/12 гадзін. Больш за тыдзень да пачатку эксперыменту жывёл знаёмілі з умовамі. Жывёлы мелі вольны запас корму і вады. Ва ўсіх эксперыментальных працэдурах на жывёл строга выконваліся дзеючыя этычныя правілы догляду за жывёламі і абыходжання з імі ва Універсітэце Гашон (GIACUC-R2019003). Даследаванне было распрацавана сляпым і паралельным выпрабаваннем. Мы прытрымліваліся метаду эўтаназіі ў адпаведнасці з рэкамендацыямі Камітэта па этыцы эксперыментальных жывёл.
2.4. Ін'екцыі і лячэнне MIA
Пацукі былі выпадковым чынам падзеленыя на 4 групы, а менавіта фіктыўныя, кантрольныя, індаметацын і A. lappa. Пад наркозам 2% сумесі изофторана O2 пацукам ўводзілі 50 мкл MIA (40 мг/м; Sigma-Aldrich, Сэнт-Луіс, Місуры, ЗША) унутрысустаўна ў каленныя суставы, каб прывесці да эксперыментальнага ОА. Лячэнне праводзілі, як паказана ніжэй: кантрольная і фіктыўная групы падтрымліваліся толькі з базавай дыетай AIN-93G. Толькі група індаметацыну атрымала індаметацын (3 мг/кг), уключаны ў дыету AIN-93G, а група A. lappa 300 мг/кг была прызначана на дыету AIN-93G з дадаткам A. lappa (300 мг/кг). Лячэнне працягвалі на працягу 24 дзён з дня індукцыі ОА з разліку 15-17 г на 190-210 г масы цела ў суткі.
2.5. Вымярэнне апоры
Пасля індукцыі ОА вымярэнне нагрузачнай здольнасці задніх канечнасцяў пацукоў праводзілася з дапамогай incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Вудленд-Хілз, Каліфорнія, ЗША), як было запланавана. Разлічваецца размеркаванне вагі на задніх канечнасцях: грузападымальнасць (%)
