Астэаартроз (АА) — адно з хранічных дэгенератыўных захворванняў костак і суставаў, якое дзівіць людзей старэйшых за 65 гадоў [...
1]. Звычайна ў пацыентаў з астэаартрозам дыягнастуюць пашкоджанне храстка, запаленне сіновіальнай абалонкі і эрозію хондрацытаў, што выклікае боль і фізічны дыскамфорт [
2]. Боль пры артрыце ў асноўным выклікана дэгенерацыяй храстка ў суставах з-за запалення, і калі храсток сур'ёзна пашкоджаны, косці могуць сутыкацца адна з адной, выклікаючы невыносны боль і фізічныя цяжкасці [
3]. Удзел запаленчых медыятараў у такіх сімптомах, як боль, ацёк і скаванасць сустава, добра дакументаваны. У пацыентаў з астэаартрозам у сіновіальнай вадкасці выяўляюцца запаленчыя цытакіны, якія выклікаюць эрозію храстка і субхандральнай косткі [
4Дзве асноўныя скаргі, якія звычайна маюць пацыенты з астэаартрозам, - гэта боль і запаленне сіновіальнай абалонкі. Таму асноўнымі мэтамі сучаснай тэрапіі астэаартрозу з'яўляюцца зніжэнне болю і запалення. [
5]. Нягледзячы на тое, што даступныя метады лячэння астэаартрозу, у тым ліку нестероідныя і стэроідныя прэпараты, даказалі сваю эфектыўнасць у палягчэнні болю і запалення, працяглае прымяненне гэтых прэпаратаў мае сур'ёзныя наступствы для здароўя, такія як сардэчна-сасудзістыя, страўнікава-кішачныя і нырачныя парушэнні [
6Такім чынам, для лячэння астэаартозу неабходна распрацаваць больш эфектыўныя лекі з меншай колькасцю пабочных эфектаў.
Натуральныя прадукты для здароўя становяцца ўсё больш папулярнымі, бо яны бяспечныя і лёгкадаступныя [
7]. Традыцыйныя карэйскія лекі даказалі сваю эфектыўнасць у лячэнні некалькіх запаленчых захворванняў, у тым ліку артрыту [
8]. Aucklania lappa DC. вядомая сваімі лекавымі ўласцівасцямі, такімі як паляпшэнне цыркуляцыі цы для зняцця болю і супакойвання страўніка, і традыцыйна выкарыстоўваецца як натуральны абязбольвальны сродак [
9]. Папярэднія паведамленні паказваюць, што A. lappa валодае супрацьзапаленчымі ўласцівасцямі [
10,
11], абязбольвальнае [
12], супрацьракавыя [
13] і гастрапратэктарныя [
14] эфекты. Розныя біялагічныя дзеянні A. lappa абумоўлены яго асноўнымі актыўнымі злучэннямі: кастунолідам, дэгідракостус-лактонам, дыгідракастунолідам, кастуслактонам, α-кастолам, лактонам соссюрэі і кастуслактонам [
15]. Папярэднія даследаванні сцвярджаюць, што кастунолід праяўляў супрацьзапаленчыя ўласцівасці ў ліпапаліцукрыдзе (ЛПС), які індукаваў макрафагі праз рэгуляцыю шляху NF-kB і бялку цеплавога шоку [
16,
17]. Аднак ні ў адным даследаванні не вывучалася патэнцыйная актыўнасць A. lappa для лячэння астэаартрозу. У гэтым даследаванні вывучаўся тэрапеўтычны эфект A. lappa супраць астэаартрозу з выкарыстаннем мадэляў міякарда, выкліканага (монатрыйёдаацэтатам) і воцатнай кіслатой, на грызунах.
Монанатрыйёдаацэтат (МІА) вядомы сваім выкарыстаннем для ўзнікнення значнай часткі болевых паводзін і патафізіялагічных асаблівасцей астэаартрозу ў жывёл [
18,
19,
20]. Пры ўвядзенні ў каленныя суставы МІА парушае метабалізм хондрацытаў і выклікае запаленне і запаленчыя сімптомы, такія як эрозія храстка і субхондральнай косткі, асноўныя сімптомы астэаартрозу [
18]. Рэакцыя корчання, выкліканая воцатнай кіслатой, шырока разглядаецца як сімуляцыя перыферычнага болю ў жывёл, дзе запаленчы боль можна колькасна вымераць [
19]. Лінія клетак мышэйных макрафагаў RAW264.7 шырока выкарыстоўваецца для вывучэння клеткавых рэакцый на запаленне. Пасля актывацыі ЛПС макрафагі RAW264 актывуюць запаленчыя шляхі і вылучаюць некалькі запаленчых пасярэднікаў, такіх як TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS і IL-6 [
20]. У гэтым даследаванні ацэньваліся антыноцыцэптыўныя і супрацьзапаленчыя эфекты A. lappa супраць астэаартрозу ў жывёльнай мадэлі MIA, жывёльнай мадэлі, індукаванай воцатнай кіслатой, і ў клетках RAW264.7, актываваных LPS.
2. Матэрыялы і метады
2.1. Раслінны матэрыял
Высушаны корань A. lappa DC., які выкарыстоўваўся ў эксперыменце, быў атрыманы ў кампаніі Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Сеул, Карэя). Яго ідэнтыфікаваў прафесар Донхун Лі, кафедра фітафармакалогіі, калега карэйскай медыцыны Гачхонскага ўніверсітэта, а нумар узору ваўчара быў дэпазітаваны як 18060301.
2.2. ВЭЖХ-аналіз экстракта A. lappa
A. lappa экстрагавалі з дапамогай рэфлюкснага апарата (дыстыляваная вада, 3 гадзіны пры 100 °C). Экстрагаваны раствор фільтравалі і кандэнсавалі з дапамогай выпарніка нізкага ціску. Выхад экстракта A. lappa склаў 44,69% пасля ліафілізацыі пры тэмпературы -80 °C. Храматаграфічны аналіз A. lappa праводзілі з дапамогай ВЭЖХ, падлучанага да сістэмы ВЭЖХ 1260 Infinity II (Agilent, Пал-Альта, Каліфорнія, ЗША). Для храматычнага падзелу выкарыстоўвалі калонку EclipseXDB C18 (4,6 × 250 мм, 5 мкм, Agilent) пры тэмпературы 35 °C. Усяго 100 мг узору разводзілі ў 10 мл 50% метанолу і апрацоўвалі ультрагукам на працягу 10 хвілін. Узоры фільтравалі праз шпрыцавы фільтр (Waters Corp., Мілфард, Масачусэтс, ЗША) з памерам пор 0,45 мкм. Склад рухомай фазы складаў 0,1% фосфарнай кіслаты (А) і ацэтанітрылу (В), а калонка элюіравалася наступным чынам: 0–60 хвілін, 0%; 60–65 хвілін, 100%; 65–67 хвілін, 100%; 67–72 хвіліны, 0% растваральніка В з хуткасцю патоку 1,0 мл/мін. Элюент назіраўся пры 210 нм з выкарыстаннем аб'ёму ін'екцыі 10 мкл. Аналіз праводзіўся ў трох паўторах.
2.3. Утрыманне і кіраванне жывёламі
Самцы пацукоў Sprague-Dawley (SD) ва ўзросце 5 тыдняў і самцы мышэй ICR ва ўзросце 6 тыдняў былі набыты ў Samtako Bio Korea (Кёнгі-до, Карэя). Жывёл утрымлівалі ў памяшканні з пастаяннай тэмпературай (22 ± 2 °C) і вільготнасцю (55 ± 10%), а таксама з цыклам святла/цемры 12/12 гадзін. Жывёл знаёмілі з умовамі больш чым за тыдзень да пачатку эксперыменту. Жывёлы мелі ўволю запас корму і вады. Ва ўсіх эксперыментальных працэдурах на жывёлах строга выконваліся дзеючыя этычныя правілы догляду і абыходжання з жывёламі ва Універсітэце Гачон (GIACUC-R2019003). Даследаванне было распрацавана як сляпое і паралельнае выпрабаванне для даследчыкаў. Мы прытрымліваліся метаду эўтаназіі ў адпаведнасці з рэкамендацыямі Камітэта па этыцы эксперыментаў на жывёлах.
2.4. Ін'екцыя і лячэнне пры знікненні невядомага
Пацукоў выпадковым чынам падзялілі на 4 групы: кантрольную, кантрольную, індаметацынавую і A. lappa. Пасля анестэзіі 2% сумессю ізафлуарану O2 пацукам уводзілі 50 мкл MIA (40 мг/м2; Sigma-Aldrich, Сэнт-Луіс, Місуры, ЗША) унутрысустаўна ў каленныя суставы для выклікання эксперыментальнага астэаартрозу. Лячэнне праводзілася наступным чынам: кантрольная і кантрольная групы атрымлівалі толькі базавы рацыён AIN-93G. Групе з індаметацынам давалі індаметацын (3 мг/кг), уключаны ў рацыён AIN-93G, а групе з A. lappa ў дозе 300 мг/кг давалі рацыён AIN-93G з дадаткам A. lappa (300 мг/кг). Лячэнне працягвалі на працягу 24 дзён з дня індукцыі астэаартрозу з разліку 15–17 г на 190–210 г масы цела штодня.
2.5. Вымярэнне вагі на падшыпніку
Пасля індукцыі астэаартозу (АА) была праведзена вымярэнне грузападымальнасці задніх канечнасцяў пацукоў з дапамогай прыбора incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Вудленд-Хілз, Каліфорнія, ЗША) у адпаведнасці з графікам. Было разлічана размеркаванне вагі на задніх канечнасцях: грузападымальнасць (%)
