Чыстае алей Saposhnikovia divaricata для вырабу свечак і мыла, аптовы дыфузар, эфірны алей, навінка для дыфузараў чаротавых гарэлак

кароткае апісанне:

 

2.1. Падрыхтоўка СДЭ

Карэнішчы SD былі набыты ў выглядзе высушанай травы ў Hanherb Co. (Гуры, Карэя). Раслінныя матэрыялы былі таксанамічна пацверджаны доктарам Го-Я Чоем з Карэйскага інстытута ўсходняй медыцыны (KIOM). Узор ваўчара (нумар 2014 SDE-6) быў змешчаны ў Карэйскі гербарый стандартных раслінных рэсурсаў. Высушаныя карэнішчы SD (320 г) двойчы экстрагировали 70% этанолам (пры кіпячэнні з зваротным халадзільнікам на працягу 2 гадзін), а затым экстракт канцэнтравалі пры паніжаным ціску. Адвар працаджваюць, лиофилизируют і захоўваюць пры тэмпературы 4°С. Выхад высушанага экстракта з неапрацаваных зыходных матэрыялаў склаў 48,13% (мас.).

 

2.2. Колькасны аналіз высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі (ВЭЖХ).

Храматаграфічны аналіз праводзілі з дапамогай сістэмы ВЭЖХ (Waters Co., Мілфард, штат Масачусэтс, ЗША) і фотадыёднага дэтэктара. Для ВЭЖХ-аналізу SDE прым-O-стандарт глюкозілцыміфугіна быў набыты ў Карэйскім інстытуце садзейнічання індустрыі традыцыйнай медыцыны (Кёнсан, Карэя) ісек-О-глюкозілхамаудол і 4'-O-β-D-глюкозіл-5-O-метилвизаминол былі вылучаныя ў нашай лабараторыі і ідэнтыфікаваныя з дапамогай спектральнага аналізу, у першую чаргу з дапамогай ЯМР і МС.

Узоры SDE (0,1 мг) раствараюць у 70% этаноле (10 мл). Храматаграфічнае падзел праводзілі з дапамогай калонкі XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 мм, 5μм, Waters Co., Мілфард, Масачусэтс, ЗША). Рухомая фаза складалася з ацэтанітрылу (А) і 0,1% раствора воцатнай кіслаты ў вадзе (Б) пры хуткасці патоку 1,0 мл/мін. Шматэтапная праграма градыенту выкарыстоўвалася наступным чынам: 5% А (0 мін), 5–20% А (0–10 мін), 20% А (10–23 мін) і 20–65% А (23–40 мін). ). Даўжыня хвалі выяўлення сканавалася пры 210–400 нм і запісвалася пры 254 нм. Аб'ём ін'екцыі быў 10,0μL. Стандартныя растворы для вызначэння трох хромонов рыхтавалі ў канчатковай канцэнтрацыі 7,781 мг/мл (прым.O-глюкозілцыміфугін), 31,125 мг/мл (4′-O-β-D-глюкозіл-5-O-метилвизаминола) і 31,125 мг/мл (сек-О-glucosylhamaudol) у метаноле і вытрымліваюць пры 4 ° C.

2.3. Ацэнка супрацьзапаленчай актыўнасціIn Vitro

2.3.1. Культура клетак і апрацоўка ўзораў

Клеткі RAW 264.7 былі атрыманы з Амерыканскай калекцыі тыпавых культур (ATCC, Manassas, VA, USA) і вырашчаны ў асяроддзі DMEM, якая змяшчае 1% антыбіётыкаў і 5,5% FBS. Клеткі инкубировали ў увлажненной атмасферы 5% CO2 пры 37°C. Для стымуляцыі клетак асяроддзе замянялі свежай асяроддзем DMEM і ліпапаліцукрыдам (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Сэнт-Луіс, Місуры, ЗША) пры 1μг/мл дадавалі ў прысутнасці або адсутнасці SDE (200 або 400μг/мл) на працягу дадатковых 24 гадзін.

2.3.2. Вызначэнне аксіду азоту (NO), простагландыну E2 (PGE2), фактару некрозу пухліны-α(TNF-α), І Інтэрлейкін-6 (IL-6) Вытворчасць

Клеткі апрацоўвалі SDE і стымулявалі LPS на працягу 24 гадзін. Выпрацоўка NO была прааналізавана шляхам вымярэння нітрытаў з выкарыстаннем рэактыва Грыса ў адпаведнасці з папярэднім даследаваннем [12]. Сэкрэцыя запаленчых цітокіны PGE2, TNF-α, і IL-6 вызначалі з дапамогай набору ELISA (сістэмы даследаванняў і распрацовак) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы. Уплыў SDE на выпрацоўку NO і цітокіны вызначалі пры 540 нм або 450 нм з дапамогай Wallac EnVision™счытвальнік мікрапланшэтаў (PerkinElmer).

2.4. Ацэнка противоостеоартритической актыўнасціIn Vivo

2.4.1. Жывёлы

Самцы пацукоў Sprague-Dawley (7 тыдняў) былі набыты ў Samtako Inc. (Осан, Карэя) і ўтрымліваліся ў кантраляваных умовах з 12-гадзінным цыклам святла/цемры пры°C і% вільготнасці. Пацукоў забяспечвалі лабараторнай дыетай і вадойad libitum. Усе эксперыментальныя працэдуры праводзіліся ў адпаведнасці з рэкамендацыямі Нацыянальнага інстытута аховы здароўя (NIH) і былі адобраны Камітэтам па догляду і выкарыстанні жывёл Тэджонскага ўніверсітэта (Тэджон, Рэспубліка Карэя).

2.4.2. Індукцыя ОА з MIA ў пацукоў

Жывёлы былі рандомізірованный і размеркаваны на групы лячэння перад пачаткам даследавання (на групу). Раствор МІА (3 мг/50 гμл 0,9% фізіялагічнага раствора) ўводзілі непасрэдна ва внутрісуставные прастору правага каленнага сустава пад анестэзіяй, выкліканай сумессю кетамін і ксилазина. Пацукоў выпадковым чынам падзялілі на чатыры групы: (1) групу фізіялагічнага раствора без ін'екцыі MIA, (2) групу MIA з ін'екцыяй MIA, (3) групу, якая атрымлівала SDE (200 мг/кг) з ін'екцыяй MIA і (4 ) група, якая атрымлівала индометацин (IM-) (2 мг/кг) з ін'екцыяй MIA. Пацукам ўводзілі перорально SDE і IM за 1 тыдзень да ін'екцыі MIA на працягу 4 тыдняў. Дазавання SDE і IM, якія выкарыстоўваліся ў гэтым даследаванні, была заснавана на тых, якія выкарыстоўваліся ў папярэдніх даследаваннях [10,13,14].

2.4.3. Вымярэнні размеркавання нагрузкі на заднюю лапу

Пасля індукцыі ОА першапачатковы баланс у здольнасці несці вагу задніх лап быў парушаны. Тэстар непрацаздольнасці (Linton instrumentation, Norfolk, Вялікабрытанія) быў выкарыстаны для ацэнкі змяненняў у допуску да нагрузкі. Пацукоў асцярожна змяшчалі ў вымяральную камеру. Сіла апорнай вагі, якую дзейнічае задняя канечнасць, была асераднёная за перыяд 3 с. Каэфіцыент размеркавання вагі быў разлічаны па наступнай формуле: [вага на правай задняй канечнасці/(вага на правай задняй канечнасці + вага на левай задняй канечнасці)] × 100 [15].

2.4.4. Вымярэнне ўзроўню цітокіны ў сыроватцы крыві

Узоры крыві центрифугировали пры 1500 g на працягу 10 мін пры 4 ° С; затым сыроватку збіралі і захоўвалі пры -70°C да выкарыстання. Ўзроўні IL-1β, IL-6, TNF-αі PGE2 у сыроватцы крыві вымяралі з дапамогай набораў для аналізу ELISA ад R&D Systems (Мінеапаліс, Міннесота, ЗША) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы.

2.4.5. Колькасны RT-PCR аналіз у рэжыме рэальнага часу

Агульную РНК экстрагавалі з тканіны каленнага сустава з дапамогай рэагента TRI (Sigma-Aldrich, Сэнт-Луіс, штат Місуры, ЗША), адваротна транскрыбавалі ў кДНК і ПЦР-ампліфікавалі з выкарыстаннем набору TM One Step RT PCR з зялёным SYBR (Applied Biosystems). , Гранд-Айлэнд, Нью-Ёрк, ЗША). Колькасная ПЦР у рэжыме рэальнага часу праводзілася з дапамогай сістэмы Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Гранд-Айлэнд, Нью-Ёрк, ЗША). Паслядоўнасці праймераў і паслядоўнасць зонда паказаны ў табл1. Аліквоты ўзораў кДНК і роўная колькасць кДНК GAPDH былі ампліфікаваны з дапамогай галоўнай сумесі TaqMan® Universal PCR, якая змяшчае ДНК-палімеразу ў адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы (Applied Biosystems, Фостэр, Каліфорнія, ЗША). Умовы ПЦР складалі 2 мін пры 50 ° C, 10 мін пры 94 ° C, 15 с пры 95 ° C і 1 мін пры 60 ° C на працягу 40 цыклаў. Канцэнтрацыя гена-мішэні была вызначана з выкарыстаннем параўнальнага метаду Ct (парогавага цыклу ў кропцы перакрыжавання паміж графікам ампліфікацыі і парогам) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы.

Кошт FOB:0,5 - 9999 долараў ЗША / шт

Мінімальная колькасць замовы:100 штук/штук

Магчымасць пастаўкі:10000 штук/штук у месяц